TINCIÓN DE GRAM

Tiene su origen en el año 1884 con el científico Hans Christian Gram. Es un método de tinción que se usa para identificar bacterias de acuerdo a sus diferencias en su pared celular. Cuando la pared celular es gruesa y sana se denomina Gram positiva y cuando la pared es delgada y dañada se denomina Gram negativa. Esta diferencia se logra gracias a la reacción con el ácido peptidoglucano o mureína.
La tinción de Gram tiene teorías que la han desarrollado y perfeccionado.
• Steam y Steam en 1923, los cuales hablan de la combinación química de los colorantes y las proteínas.
• Gianni en 1952, propone un proceso que lo determina como inversión de la reacción.
• Libenson y Mcllroy plantean los factores que intervienen en la coloración.
La tinción de Gram se usa para la identificación de bacterias, para determinar la utilidad y control de la calidad de las bacterias y para determinar la importancia de la calidad.
Con la tinción de Gram se identifican diferentes formas de bacterias como: cocos, bacilos espirilos (rígidos), espiroquetas (blandos), vibriones (en forma de coma).
Técnica de la tinción de Gram:
-Recoger muestra estéril
- Hacer el extendido en espiral
- Dejar secar a temperatura ambiente
- Fijar la muestra al calor (flamenado 3 veces aprox.)
- Agregar cristal violeta al y esperar 1 minuto. Este tinte dejará de color morado las bacterias Gram positivas.
- Enjuagar con agua corriente. *
- Agregar lugol y esperar 1 minuto.
- Enjuagar con agua corriente.
- Agregar alcohol y acetona por goteo y esperar 15 segundos.
- Enjuagar con agua.
- Agregar safranina y esperar 30 segundos. Este tinte dejará de color rosado las bacterias Gram negativas.
- Enjuagar con agua.
- Chorro suave ya sea con piseta o directo de la llave
- Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.
BIBLIOGRAFIA
- Forbes, B.A., Sahm D. F. Weissfeld A.S. 1993 Bailey & Scott's Diagnostic Microbiology. 506 pp
- Schlegel, H. G.. 1997. “Microbiología general” 9. ed. Barcelona : Omega, 654pp
http://www.ciencias.uma.es/publicaciones/encuentros/ENCUENTROS62/metodo.html http://edicion-micro.usal.es/web/educativo/micro2/tema01.html
- http://www.rnw.nl/informarn/html/cienciapenicilina990902.html